產(chǎn)品簡介：

　 ChIP-Seq整合了染色質(zhì)免疫共沉淀（ChIP）和高通量測序的技術(shù)優(yōu)勢，較ChIP-chip具有更大的開放性和精確性，可實(shí)現(xiàn)對(duì)任意物種的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白全基因組范圍內(nèi)DNA結(jié)合位點(diǎn)，為全面解析基因調(diào)控提供了新的支撐技術(shù)。ChIP-Seq首先利用抗體特異性地富集蛋白-DNA復(fù)合體，然后純化DNA片段，并經(jīng)末端修復(fù)、加A和加測序接頭后，再經(jīng)低循環(huán)數(shù)的PCR擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳回收特定大小片段，完成測序文庫制備的工作。構(gòu)建好的文庫經(jīng)cBot擴(kuò)增，用Illumina GAIIx進(jìn)行測序，并通過生物信息學(xué)分析，鑒定出目的蛋白與基因組DNA結(jié)合的位點(diǎn)。

產(chǎn)品名稱：Illumina chip-seq文庫制備試劑盒48樣本

產(chǎn)品貨號(hào)：IP-202-1012 

產(chǎn)品特點(diǎn)：

產(chǎn)品優(yōu)勢：

精確性高：基因組結(jié)合位點(diǎn)定位精確性可達(dá)±50bp。

可靠性高：比ChIP-Chip具有更低的背景，無交叉雜交非特異性。

檢測動(dòng)力學(xué)范圍廣：定量檢測不同結(jié)合強(qiáng)度轉(zhuǎn)錄因子/組蛋白的結(jié)合特異性。

全面的分析：可在全基因組范圍內(nèi)鑒定結(jié)合位點(diǎn)，無需候選序列信息。

更經(jīng)濟(jì)的分析：花費(fèi)只有全基因組ChIP-Chip的1/30～1/10。

更低的起始樣品量：僅需低至10～50ng的免疫沉淀DNA

技術(shù)參數(shù)：

樣本要求：

細(xì)胞樣品：單次樣品制備需大于2×107細(xì)胞。1%甲醛固定細(xì)胞后，PBS清洗細(xì)胞3次，離心收集細(xì)胞沉淀，液氮速凍，-80℃保存，干冰運(yùn)輸。

ChIP DNA樣品：樣品量大于50ng，樣品濃度不低于10ng/μl，OD260/OD280為1.8～2.0。DNA片段大小在100～500bp之間，主帶明顯。樣品最好進(jìn)行過ChIP-PCR驗(yàn)證。樣品溶于超純水中，放于DNase-free的不黏管中，管口用封口膜封好，干冰運(yùn)輸。

相關(guān)知識(shí)：

Illumina二代測序技術(shù)，邊合成邊測序（SBS），是廣泛采用的新一代測序（NGS）技術(shù)，負(fù)責(zé)產(chǎn)生世界上90％以上的測序數(shù)據(jù)。

Illumina的二代測序技術(shù)稱為邊合成邊測序(Sequencing-by-Synthesis,簡稱SBS)。SBS主要包括堿基延伸、熒光激發(fā)及信號(hào)收集、剪切等3個(gè)步驟。這3個(gè)步驟可以重復(fù)，循環(huán)進(jìn)行。每循環(huán)一次測定一個(gè)堿基。想測定多少個(gè)堿基（即讀長），就循環(huán)多少次。測序循環(huán)次數(shù)可以在軟件里設(shè)定。到底測序多長合適，要根據(jù)項(xiàng)目性質(zhì)和需求來決定。大多數(shù)情況下，SR實(shí)驗(yàn)（單端測序）測定1x50個(gè)堿基，PE實(shí)驗(yàn)（雙端測序）測定2x150個(gè)堿基。

1 堿基延伸

Illumina測序試劑里所使用的dNTP特色，它們同時(shí)具有兩個(gè)修飾基團(tuán)：一個(gè)熒光基團(tuán)，一個(gè)可逆終止基團(tuán)?？赡娼K止基團(tuán)技術(shù)是Illumina二代測序的一大特色。它與橋式PCR技術(shù)一起，構(gòu)成了Illumina二代測序的兩大支柱，為穩(wěn)定獲得高質(zhì)量的測序數(shù)據(jù)打下了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)。

2 信號(hào)采集

HiSeq系列測序儀具有紅綠兩根激光管，兩個(gè)濾色片。它們兩兩組合，可以形成4種不同的激發(fā)波長，正好分別用于激發(fā)A、G、C、T 4種堿基。

Cluster上所標(biāo)記的熒光基團(tuán)在激光激發(fā)下產(chǎn)生的信號(hào)，可以用相機(jī)拍攝或者掃描的方式收集信號(hào)。掃描技術(shù)速度比較快，被X10系列采用。由于FC面積比較大，而且上表面和下表面要分別拍照，所以拍照過程相當(dāng)耗時(shí)。對(duì)于經(jīng)典的HiSeq 2000來說，一次測序循環(huán)所產(chǎn)生的熒光信號(hào)，需要大約40分鐘的時(shí)間才能拍照收集完畢，時(shí)間比測序反應(yīng)本身還要長。

3 剪切

熒光信號(hào)收集完畢后，關(guān)閉激光，用剪切劑去除測序引物的延伸產(chǎn)物上的堿基所標(biāo)記的熒光基團(tuán)和終止基團(tuán)。兩個(gè)修飾基團(tuán)均被切除，一方面消去干擾熒光，一方面使鏈末端的堿基回復(fù)到自然的可延伸狀態(tài)，為下一輪測序做好準(zhǔn)備。

再重復(fù)合成、激發(fā)、收集等步驟，即可進(jìn)行第二個(gè)堿基的測序。

產(chǎn)品訂購信息  

品牌               貨號(hào)                         名稱                            規(guī)格

Illumina   IP-202-1012   TruSeq ChIP文庫制備試劑盒     12 indexes, 48 Rxns

Illumina   IP-202-1024   TruSeq ChIP文庫制備試劑盒     12 indexes, 48 Rxns

產(chǎn)品名稱：Illumina chip-seq文庫制備試劑盒48樣本

產(chǎn)品貨號(hào)：IP-202-1012

關(guān)于公司：

Illumina的目標(biāo)是應(yīng)用創(chuàng)新技術(shù)來分析遺傳變異和功能，實(shí)現(xiàn)幾年前甚至還無法想象的研究。我們的任務(wù)是提供創(chuàng)新、靈活、可擴(kuò)展的解決方案以滿足客戶的需求。作為一家重視合作互動(dòng)、快速交付解決方案和提供高質(zhì)量水平的全球性公司，我們努力應(yīng)對(duì)這一挑戰(zhàn)。Illumina創(chuàng)新的測序和芯片技術(shù)正在推動(dòng)生命科學(xué)研究、轉(zhuǎn)化和消費(fèi)者基因組學(xué)以及分子診斷中的進(jìn)展。

紅榮微再——助理分子診斷新未來

紅榮微再作為RNA、NGS、ctDNA、qPCR的分子診斷專業(yè)供應(yīng)商，以“傳遞科學(xué)價(jià)值，服務(wù)科學(xué)研究"為宗旨,努力為客戶提供質(zhì)量可靠、貨美價(jià)優(yōu)的分子診斷試劑耗材，與客戶攜手為中國分子診斷的發(fā)展而前行。