LONZA支原體檢測(cè)試劑盒操作步驟：

　　貼壁細(xì)胞：

　　1.被檢細(xì)胞接種于無菌的6孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，接種密度為1-2×104。同時(shí)，接種正常

　　無支原體感染的同種細(xì)胞，作為陰性對(duì)照。

　　2.5天后，先吸去培養(yǎng)液，再加入1ml的固定液，靜置20min，

　　3.吸去固定液，晾干。

　　4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部

　　被檢細(xì)胞)，37℃避光放置15-20min或室溫靜置20～30min。

　　5.吸去Hoechst 33258工作液，加入2ml滅菌超純水洗滌三次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加

　　入一滴封片液，并以蓋玻片覆蓋。

　　6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀

　　熒光小點(diǎn)。

　　懸浮細(xì)胞：

　　1.收集需檢測(cè)的細(xì)胞，1500rpm，5min。

　　2.將收集的細(xì)胞涂片于載玻片上，再加1ml的固定液，靜置20min。

　　3.吸去固定液，晾干。

　　4.于每孔中，加入1ml的Hoechst33258工作液(Hoechst 33258工作液須覆蓋全部

　　被檢細(xì)胞)，37℃避光放置15～20min或室溫靜置20～30min。

　　5.吸去Hoechst 33258工作液，用無菌水洗滌玻片3次，直接風(fēng)干。風(fēng)干后加入一滴

　　封固液，并以蓋玻片覆蓋。

　　6.熒光顯微鏡觀察。用紫外激發(fā)光激發(fā)，觀察細(xì)胞周圍是否有藍(lán)色熒光小點(diǎn)或串珠狀

　　熒光小點(diǎn)。

　　結(jié)果判斷(參考)：

　　陰性：僅見細(xì)胞的細(xì)胞核呈現(xiàn)黃綠色熒光。

　　陽性：除細(xì)胞外，細(xì)胞周圍可見大量的大小均一的熒光著色顆粒。