產(chǎn)品名稱：Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit         

產(chǎn)品貨號：Y30021

產(chǎn)品說明：

我們的CRISPR / Cas9系統(tǒng)是介導(dǎo)哺乳動物細胞中基因組編輯的一種簡單的，RNA可編程的方法；它可用于在hiPS細胞中產(chǎn)生基因敲除（通過插入/刪除）或敲除（通過HDR）。交付Cas9-sgRNA核糖核蛋白（RNP）復(fù)合物后，必須分離單個細胞并將其擴增為克隆細胞系，以分離和篩選目標基因型。傳統(tǒng)上，從作為集落生長和傳代的經(jīng)過編輯的hiPS細胞建立克隆種群效率低下且耗時。通常，它會導(dǎo)致細胞死亡或過早分化。為克服這一挑戰(zhàn)，我們開發(fā)了完整的系統(tǒng)，該系統(tǒng)通過有效傳遞Cas9-sgRNA RNP復(fù)合物和hiPS細胞的單細胞克隆，將無足跡的基因編輯結(jié)合在一起。使用我們基于單層的培養(yǎng)系統(tǒng)可成功完成單細胞克隆

產(chǎn)品介紹：

人誘導(dǎo)多能干細胞（Human induced pluripotent stem cells，hiPSCs)是一個功能強大的研究工具和疾病模型，因為其具備增殖、自我更新、分化為多種細胞類型的能力。此外，人iPS細胞還可以再現(xiàn)細胞來源個體的疾病表型和基因型。將人iPS細胞結(jié)合基于CRISPR/Cas9的基因編輯技術(shù)，可以在同基因的細胞系中研究特定基因改變引起的功能影響，因為基因編輯過的人iPS細胞能提供可再生的、無遺傳變異的患病細胞和健康細胞資源。

CRISPR/Cas9系統(tǒng)已經(jīng)成為一個強大的基因編輯工具，因為其高的靶向特異性，編輯效率和易用性。該技術(shù)的強大主要源于它的簡單，因為全部只需要一個Cas9核酸酶結(jié)合一個單鏈向?qū)NA（single guide RNA，sgRNA) 就可以決定靶向特異性（Jinek et al. 2012)。這種RNA編程的（RNA-programmable）方法利用了非同源末端連接(non-homologous end joining，NHEJ) DNA修復(fù)途徑的易錯特性，進而產(chǎn)生基因敲除(通過插入/刪除)。這種方法也可以通過同源重組（homology-directed repair，HDR)途徑被用于基因敲入。

 CRISPR/Cas9系統(tǒng)的組件可以通過多種方法成功導(dǎo)入至靶細胞，包括基于載體的表達系統(tǒng)，RNA轉(zhuǎn)染, 導(dǎo)入Cas9/sgRNA核糖核蛋白（ribonucleoprotein，RNP)復(fù)合物(Sander and Joung 2014)等。與基于載體的方法相比，直接導(dǎo)入Cas9/sgRNA RNPs提供了一種快速轉(zhuǎn)入基因編輯實驗的方法，同時脫靶效應(yīng)的可能性更小（Kim et al. 2014)。

 一旦Cas9/sgRNA RNP復(fù)合物被導(dǎo)入，為了分離和篩選感興趣的基因型，單細胞必須被分離并擴增為克隆細胞系。傳統(tǒng)上,從基因編輯的hiPS細胞建立一個克隆群是低效的、具有挑戰(zhàn)性的和耗時的，因為hiPS 細胞是以集落生長和傳代的。通常，這會導(dǎo)致細胞死亡和提前分化。然而，Cellartis基因編輯和單細胞克隆系統(tǒng)包含一個成分確定的培養(yǎng)系統(tǒng)(由基礎(chǔ)培養(yǎng)基，包被劑，和添加劑組成)，用于有效形成單細胞克隆和擴增基因編輯后的hiPSC克隆。DEF-CS culture system (Asplund et al. 2016)是一個基于單層培養(yǎng)的系統(tǒng)，規(guī)避了集落狀培養(yǎng)帶來的挑戰(zhàn)，允許單細胞傳代和促進接種的單細胞存活和后續(xù)擴增。

 Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (Code No. Y30021) 是一個完整的，在無飼養(yǎng)層和成分確定條件下，用于hiPSCs有效擴增和擴大生產(chǎn)的系統(tǒng)。試劑盒包含了從接種單細胞至96孔板到擴增至48孔板過程中所有必要的試劑。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

 Cellartis iPSC rCas9 Electroporation and Single-Cell Cloning System (Code No. 632643) 是一個完整的系統(tǒng)，允許通過電穿孔的方法對hiPSCs進行有效的基因編輯以及隨后的單細胞克隆形成和擴增至48孔板。該系統(tǒng)中提供了重組Cas9蛋白質(zhì)，以及產(chǎn)生大量sgRNAs所有必要的試劑，用于電穿孔hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit (前面所述) 組份，用于進行基因編輯后的單細胞克隆形成和擴增。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

 Cellartis iPSC CRISPR/Cas9 Gesicle and Single-Cell Cloning System (Code No. 632642)是一個完整的系統(tǒng)，允許通過gesicle導(dǎo)入Cas9/sgRNA復(fù)合物進行有效的基因編輯隨后的單細胞克隆形成和擴增至48孔板。Gesicles是一種無毒的、高效的、替代電穿孔的方法，不依賴昂貴的設(shè)備或耗材。系統(tǒng)中提供所有的必要試劑用于產(chǎn)生細胞衍生的納米囊泡（稱做gesicles），來轉(zhuǎn)導(dǎo)Cas9和sgRNA至hiPSCs。系統(tǒng)中也包括Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS Culture Media Kit（前面所述）組份，用于進行基因編輯后的單細胞克隆形成和擴增。單細胞克隆擴增后，hiPSCs可以使用Cellartis DEF-CS 500 Culture System (Code No. Y30010)繼續(xù)培養(yǎng)。

 ■ 產(chǎn)品特點

·在hiPSC中進行高效的基因編輯—使用電穿孔或囊泡來遞送Cas9蛋白和sgRNA，而沒有基因組整合并且降低脫靶效應(yīng)

·優(yōu)異的單細胞存活率—編輯的hiPSC植入96孔板中的單個細胞

·編輯后和單細胞克隆期間保持多能性-hiPSC維持多能性標記Oct-4，TRA-1-60和SSEA-4的高水平（> 90％）

·穩(wěn)定的核型從頭到尾—在編輯，單細胞克隆和擴增過程中保持正常且穩(wěn)定的核型

·靈活地按自己的方式進行基因編輯實驗-選擇完整的試劑盒，該試劑盒可以使用基于電穿孔的（Code No. 632643）或基于囊泡的（Code No. 632642）CRISPR / Cas9技術(shù)提供編輯和單細胞克隆解決方案，或者在您自己的編輯實驗后，利用培養(yǎng)基試劑盒（代碼Y30021）執(zhí)行有效的單細胞克隆

·在整個基因編輯/單細胞克隆實驗中繼續(xù)使用DEF-CS技術(shù)-使用Cellartis DEF-CS 500培養(yǎng)系統(tǒng)（代碼編號Y30010）在基因編輯實驗之前和之中，然后在單細胞克隆實驗之后放大期間

產(chǎn)品名稱：CellArits代理 iPSC單細胞克隆培養(yǎng)基試劑盒        產(chǎn)品貨號：Y30021

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CellArtis  Y30010     DEF-CS 500 Culture System,DEF-CS 500培養(yǎng)系統(tǒng)，人iPS和人ES增殖用培養(yǎng)基  1套

CellArtis  Y30021     Cellartis iPSC Single-Cell Cloning DEF-CS™ Culture Media Kit           1套

CellArtis  Y40030     GS2-M小鼠 iPS/ES干細胞無血清培養(yǎng)基                                     1套

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1993年，以中國的寶生物工程（大連）有限公司為中心，建立了研究用試劑的生產(chǎn)制造工廠，其中關(guān)于分子生物學(xué)及細胞生物學(xué)分支的研究用試劑的制造已經(jīng)取得了ISO9001認證，產(chǎn)品具有很高的品質(zhì)和成本競爭力。
    關(guān)于研發(fā)，Takara Bio構(gòu)建了日美歐中一體的研究開發(fā)體系。利用各地特性建設(shè)開發(fā)小組，努力提升新產(chǎn)品、新服務(wù)的開發(fā)力度及開發(fā)速度，從而形成更好的產(chǎn)品更快地投入市場的體制。
關(guān)于銷售，通過美國、歐洲、中國、韓國及印度的子公司和Takara Bio形成了*的銷售網(wǎng)，努力提高「TaKaRa®」「Clontech®」「Cellartis®」產(chǎn)品的品牌度并擴大產(chǎn)品銷售。
Takara Bio在引以為傲的基因工程學(xué)領(lǐng)域基礎(chǔ)上，也著手于未來有望拓展市場的再生醫(yī)療、細胞醫(yī)療研究領(lǐng)域的產(chǎn)品開發(fā)。在基因工程學(xué)方面，著重于擴大PCR技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域（Applied Field），及已處于市場日益增長的新一代測序相關(guān)新產(chǎn)品的開發(fā)等。在再生醫(yī)療、細胞醫(yī)療研究領(lǐng)域，正不斷地進行處于研發(fā)活躍期的iPS細胞（人工多能干細胞）及基因組編輯相關(guān)的新產(chǎn)品和新服務(wù)項目的開發(fā)。

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華雅再生醫(yī)學(xué)旗艦公司-紅榮微再（上海）生物工程技術(shù)有限公司：干細胞、細胞凍存、細胞治療、試劑耗材 相關(guān)板塊的產(chǎn)品，以“傳遞科學(xué)價值，服務(wù)科學(xué)研究”為宗旨，經(jīng)過近五年的努力推廣，重慶市華雅干細胞技術(shù)有限公司在全中國代理的BD科研產(chǎn)品、OriGen干細胞凍存袋等產(chǎn)品已經(jīng)成功銷往：上海市、北京市、重慶市、天津市、廣東省的廣州市、深圳市、珠海市、江西省的南昌市、四川省的成都市、綿陽、浙江省的杭州市、寧波、溫州、江蘇省的南京市、蘇州、無錫、泰州、湖南省的長沙、陜西省的西安市、楊凌、甘肅省的蘭州、寧夏的銀川、新疆的烏魯木齊、廣西的南寧市、山東省的濟南、青島、東北三省 遼寧省的沈陽市、大連市、吉林省的長春市、黑龍江省的哈爾濱市等中國絕大部分省市和自治區(qū)。

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